实验一 蠕虫虫卵检查操作技术

【实验目的】

掌握直接涂片法、沉淀法及饱和盐水漂浮法等蠕虫虫卵检查操作技术，在显微镜下识别吸虫卵、绦虫卵、线虫卵和棘头虫卵的形态特征。同时注意虫卵与非虫卵的区别。

【实验内容】

1．直接涂片法。

2．沉淀法。

3．饱和盐水漂浮法。

4．虫卵与非虫卵的区别。

5．各种蠕虫卵的形态特征。

【材料与设备】

猪粪、兔粪、羊粪、食盐、50%甘油水溶液（或清水）、火柴杆、载玻片、盖玻片、铁丝圈、纱布、吸管、烧杯、锥形瓶、玻璃棒、量筒、离心管、普通离心机、铜筛（40～60目）、光学显微镜。

【操作与观察】

一、直接涂片法

取清洁载玻片一张，在载玻片中央滴加1～2滴50%甘油水溶液或清水，然后用镊子或火柴杆取粪便一小块（约黄豆大），与甘油溶液混匀，并将粗渣推向一边，涂布均匀，做成涂片。涂片厚度以放到书上隐约可见下面的字迹为宜，加上盖玻片，置显微镜下检查。检查时先在低倍镜下查找，如发现虫卵，再换高倍镜仔细观察。

本法操作简便，能检查各种蠕虫卵，但检出率不高，特别在轻度感染时，往往得不到可靠结果。因此，本法只能作为辅助诊断方法，并且每次检查要重复8～10片，才能收到确实的效果。如无甘油，也可用清水代替，但不能用生理盐水代替，因其易析出盐结晶而影响检查结果。如加甘油可使标本清晰，易于观察，并可防止涂片很快干燥。

二、沉淀法

本法的基本原理是虫卵的比重一般比水略重，粪便中的虫卵可在水中自然沉淀于容器底部，而粪便中的饲料纤维和可溶性物质则混于或溶于粪液中。沉淀法可分为自然沉淀法和离心沉淀法两种。

1．自然沉淀法：取粪便5～10g，置于200～300mL烧杯中，先加入少量水（5～10mL），用玻璃棒捣成糊状，然后加入100～200mL清水，搅拌均匀，通过40～60目（网孔/英寸）铜筛过滤，滤液收集于烧杯中，静置沉淀20～40min，倒去上层液，保留沉渣，再加水混匀，并沉淀，如此反复操作直到上层液透明为止，用吸管吸取沉渣进行镜检。此法适合于检查吸虫卵。

2．离心沉淀法：取粪便5～10g，置于200～300mL烧杯中，先加少量水（5～10mL），用玻璃棒捣成糊状，然后加入50～100mL清水，搅拌均匀，通过40～60目铜筛过滤，滤液收集于烧杯中，然后分装至离心管中，用天平配平后放入离心机内，以2000～2500r/min离心沉淀2min，取出后倒去上清，沉淀加清水搅匀，再离心，如此反复操作至上清透明为止，最后倒去部分上清，留约沉淀2倍的溶液量，用吸管吹打均匀后，吸取粪液进行镜检。该法可缩短检查时间。

三、饱和盐水漂浮法

本法基本原理是采用比重大于虫卵的饱和溶液，使粪便中的虫卵与粪渣分开而浮集于液体表面，形成一层虫卵液膜，然后蘸取此液膜，进行镜检。

1．饱和盐水的配制：加水至锥形瓶内煮沸，每1000mL水添加食盐（普通食盐）380～400g，在容器内溶解。再以双层纱布或棉花过滤至另一洁净容器内，待凉后即可使用（溶液凉后如出现食盐结晶，则说明该溶液是饱和的，是合乎要求的，其比重为1.180，此溶液应保存于温度不低于13℃的情况下，才能保持较高比重）。

2．操作方法：取粪便5～10g，置于200～300mL烧杯中，先加入少量饱和食盐水（5～10mL），用玻璃棒捣成糊状，然后再加入100～200mL饱和食盐水，搅拌均匀，通过40～60目铜筛过滤，滤液收集于烧杯中，滤液静置10～30min。此时，比饱和盐水比重轻的虫卵，大多浮集于液体表面，再用铁丝圈蘸取此液膜，并抖落在载玻片上，盖上盖玻片，进行镜检。或者将此滤液直接倒入试管内加满，盖上盖玻片（盖玻片与液面完全接触，不能留有气泡），静置10～30min，取下盖玻片，放在载玻片上镜检，可以收到同样效果。

本法检出率高，在实际工作中已广泛应用，可以检查大多数线虫卵和绦虫卵。

为了提高漂浮法的检出率，可用其他溶液代替饱和盐水溶液，如用饱和硫代硫酸钠溶液（1000mL沸水中溶解硫代硫酸钠1750g，其比重在15～18℃时为1.370，在20～26℃时为1.410），以及饱和硫酸镁溶液（1000mL沸水中溶解硫酸镁920g，其比重为1.294），检查猪的后圆线虫卵和棘头虫卵时效果好。

四、虫卵与非虫卵的区别

镜检时要详细观察，严格区分虫卵与非虫卵。

1．虫卵（图1.1）：都有一定卵壳结构，并且有一定的形状，如圆形、椭圆形、三角形等，多数是两侧对称的，内含卵细胞或一个发育的幼虫或毛蚴，有一定的颜色，如淡黄色、褐黄色、棕黄色、银灰色。

2．非虫卵：在粪便中容易与虫卵混淆的杂物有各种植物细胞、花粉颗粒、脂肪球、气泡、真菌孢子、螨类及其卵、纤毛虫等。这些物质由于种类不同，其形状、大小、颜色也各不相同。如各种植物细胞，有的呈螺旋形，有的呈双层环状物，也有的呈铺石状，但都有明显的细胞壁，与虫卵结构明显不同。各种花粉颗粒，往往都带有一定的颜色，易被误认为是蛔虫卵，但花粉颗粒没有卵壳的构造，表面呈网状或锯齿状，仔细观察，可以区别。还有脂肪球和气泡之类，也很像虫卵，但脂肪球和气泡往往大小不一，无色，且折光性很强，周围壁较厚，而内部是空虚的，不具有虫卵的一般结构。总之，粪便中与虫卵混淆的杂物较多，但只要掌握虫卵的构造和特征是可以辨认的。有时某物与虫卵分辨不清，也可用解剖针轻轻推动盖玻片，使其下的东西滚动，这样可以将虫卵和其他物体区别开来。

五、各种蠕虫卵的形态特征

1．吸虫卵（图1.2）：多呈卵圆形或椭圆形，大小不一，卵壳由数层膜组成，比较厚而坚实。大多数吸虫卵的一端有卵盖（日本血吸虫卵除外）。新排出的吸虫卵内一般含有较多的卵黄细胞及其包围的胚细胞，有的则含有成形的毛蚴。吸虫卵常呈黄色、黄褐色或灰色，内容物较充满。

2．线虫卵（图1.3）：形状大小各不相同，一般呈椭圆形或近似圆形；光学显微镜下可见卵壳由两层组成，壳内有卵细胞，但有的线虫卵排到外界时，其内已含有幼虫。壳表面多数光滑，有的凹凸不平，颜色多为无色、透明，有些呈灰白色、褐色或黄褐色。蛔虫卵卵壳最厚，其他多数较薄。

3．绦虫卵（图1.4）：家畜中常见的为圆叶目绦虫虫卵，但实际上并非虫卵，而是卵中胚胎，多呈圆形、方形或三角形。大小不一，外层多数较厚，内有一个特殊的梨形器。梨形器内含有六钩蚴，在高倍镜下可以看到3对小钩状物；颜色多数为无色，少数为黄色或黄褐色。

4．棘头虫卵（图1.5）：多呈椭圆形或长椭圆形，卵壳很厚，外膜上常呈点状或蜂窝状构造，卵内中央有一个长椭圆形胚胎，胚胎一端有六个小钩，颜色多呈棕黄色或暗褐色。

【注意事项】

1．供检查的粪便要新鲜。粪便编号清楚，避免混淆。

2．在挑取粪便时要适量，过多会影响视野的光线，过少可能检查不出虫卵。

3．在检查过程中，粪便不能相互污染。已用过的工具，必须进行消毒或另换工具才能检查第二个粪样。

4．镜检时仔细观察，严格区别虫卵与非虫卵。

【思考题】

1．在显微镜下怎样识别虫卵与非虫卵？

2．饱和盐水漂浮法检查虫卵的基本原理是什么？

3．直接涂片法、沉淀法及饱和盐水漂浮法各自的优缺点是什么？

【实验报告要求】

1．记录实验结果。

2．绘制两种以上虫卵形态图。