【必备知识】

一、药品微生物实验室功能

2015年版《中华人民共和国药典》“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”，规范了包括人员、培养基、试剂、菌种、实验室的布局和运行、设备、样品、检验方法、污染废弃物处理、检测过程质量控制、实验记录、结果的判断和检测报告、文件等方面。

药品微生物实验室的功能可归纳为以下四个方面：①按《中华人民共和国药典》要求，进行微生物检验方法的验证、无菌检查（“9206无菌检查用隔离系统验证指导原则”）、微生物限度检查（“9202非无菌产品微生物限度检查指导原则”）、抗生素效价的微生物检定等。②按现行《药品质量管理规范》的要求对医药工业洁净室的洁净度进行微生物测定，对无菌生产区环境日常动态进行监测，以及生产过程中其他需要进行微生物检定的地方，如无菌过滤器的验证、灭菌效果验证、无菌药品包装密封性验证中微生物挑战性试验（“9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则”）。③完成工业生产用菌种或检定用菌种的培养、传代及保藏工作（“9204微生物鉴定指导原则”）。④注射剂的不溶性微粒检查、细菌内毒素检查，这类检查虽不是检查微生物，但它们对环境的要求较高，通常也是在微生物实验室完成的。

二、药品微生物实验室布局与环境要求

药品微生物实验室的环境应保证不影响检验结果的准确性，实验室应专用，工作区域与办公区域、生产区域分开。实验室布局设计的基本原则是既要最大可能地防止微生物的污染，又要防止检验过程对人员和环境造成危害，同时还应考虑活动区域的合理规划及区分，避免混乱和污染。

微生物实验室的设计和建筑材料应考虑其适用性，以利清洁、消毒、灭菌并减少污染的风险。无菌室应配备独立的空气机组或空气净化系统，以满足相应的检验要求，微生物实验的各项工作应在专属的区域进行，将污染的风险降到最低，一般情况下，药品微生物实验室应有符合无菌检查、微生物限度检查、无菌采样等检测活动的无菌室，并配备相应的培养室、实验用具准备室、洗涤区、灭菌区、标准菌株储藏室（区）、污染物处理区和文档处理区等辅助区域，阳性对照、无菌检查、微生物限度检查和抗生素微生物检定等实验室应分开设置（图1-1）。一更、二更室内除有风淋设备外，还配有消毒药品；更衣室、操作间、缓冲通道上均应设置适当数量的紫外线灯进行灭菌；操作间的空气是经过高效微粒空气滤器处理的层流空气，净化级别要求达到D级及以上；限度检查室、无菌操作室、阳性对照室局部操作区域的净化级别必须达到A级；操作间应有恒温装置（18～26℃）和除湿装置（相对湿度45%～65%）。

图1-1　微生物实验室布局示意

同时，应对上述区域明确标识。无菌室是实验室的核心部分，主要为样品提供保护，保证实验结果的准确和人员的安全。

为了保证微生物实验室洁净室（区）和隔离系统环境维持适当的水平，除保持空调系统的良好运行状态，对设施进行良好维护外，洁净室内人员应严格遵守良好的行为规范，人进出洁净区域按标准操作规程，物流通过传递窗进入。对可能影响实验结果的活动（如洁净度验证及监测、消毒、清洁维护等）有效地控制、监测并记录。

微生物实验室按相关国家标准制定有洁净室（区）环境监测标准操作规程，监测项目包括对空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、物理参数（温度、相对湿度、压差等）的有效控制和监测。实验室在使用前和使用后应进行消毒，并定期监测消毒效果，选用的消毒剂既能杀死广泛的微生物，对人体无毒害，又不会腐蚀或污染设备，有洗手和手消毒设施，有对有害微生物发生污染的处理规程。

三、微生物实验室规则

在微生物实验室进行教学活动中，可能要接触实验标本、培养物、带菌材料或器具，为了防止实验室感染和保证实训（验）顺利进行，学生必须遵守以下规则。

（1）进入实验室人员应建立有菌观念，严格无菌操作。

（2）每次实训（验）前必须预习实训（验）内容，工作服穿戴规范，生活物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。未经许可不能随便进入检验工作区域。实验室需保持安静、整洁，尽量减少室内活动，以免引起风动。不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。

（3）凡接触生物的实训（验）均应小心操作，确保安全，使用后必须用消毒剂消毒手和台面，实验过程中，如污染了实验台或地面，应用3%来苏儿或其他适宜的消毒液覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。

（4）实训（验）中如果出现菌液溢出、皮肤受损等意外事故时，应立即报告教师，并及时处理。

（5）标本（样品）处理及各项实验应在操作间进行，所有微生物培养物，均用消毒液浸泡灭菌后，才能清洗或丢弃。使用后的载玻片、盖玻片、培养皿、吸管、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗。接种环用完后应立即火焰灭菌。

（6）爱护实验仪器，遵守仪器使用规程，并做好仪器使用记录，定期清洁、维护，注意防尘和防潮。对实验室的各种耗材和药品等要节约使用，减少浪费。实验室的各种物品（培养物、药品等）未经指导教师许可，不得带出实验室。

（7）每次实训（验）过程都需要有认真、详实的记录，尤其是对需要连续观察的实训（验），则需及时记下每次观察的现象和结果，保证实训（验）结果的连续性、科学性，便于分析。未发出报告前，请勿丢弃标本；以实事求是的科学态度书写实验报告，认真思考各种实训（验）现象出现的原因。

（8）做完实训（验）后需养成良好的习惯，将实验室收拾整齐，打扫干净。对用过的仪器及各种器皿需及时清洗消毒，并归回原位。

（9）实验结束时检查电器、酒精灯、门窗等是否关闭。并将试剂、用具等放回原处，清理台面，用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物高压灭菌后处理。离开实验室前应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水冲洗干净。