任务二 常用玻璃器皿的清洗、烘干、包扎

一、任务分析

为保证微生物实验操作的安全性、可靠性,实验所用的物品在灭菌前均需进行清洗、烘干、包扎。如玻璃器皿、接种针、注射器、吸管、试管、烧杯、培养基、无菌衣、口罩等。根据器皿的实际状态:使用过的、新购置而未使用过的,器皿的污染程度、是否接触菌液等,选择适宜的清洗方法,并进行干燥、包扎。包扎可使灭菌后的器皿在一定时间内保持无菌状态。因此,器皿的清洗、烘干、包扎是微生物实验前的一项重要准备工作。

二、任务实施

1.明确目标

(1)能依据器皿的污染程度选择正确的方法完成器皿清洗。

(2)能完成培养皿、试管、锥形瓶、移液管等常用玻璃器皿的包扎。

(3)规范操作培养学生良好的职业道德,增强责任意识。

2.任务准备 

(1)试剂 新洁尔灭,75%酒精,95%酒精,5%石炭酸,2%来苏儿,2%盐酸,二甲苯,浓硫酸,重铬酸钾,洗衣粉,肥皂。

(2)器材 高压灭菌器,电炉子,烧杯,试管,吸管,培养皿,锥形瓶,载玻片,试管刷,棉花,牛皮纸或报纸,线绳,剪刀,纱布,壁纸刀。

(3)文件 药品生产企业《玻璃器皿的清洁标准操作规程》(表1-4)。

表1-4 ***药厂玻璃器皿的清洁标准操作规程

3.实施方案

(1)玻璃器皿及用具的清洗

① 使用过玻璃器皿的清洗 玻璃器皿使用后,应在未干燥之前洗涤,尤其是试管、培养皿、锥形瓶、烧杯、试剂瓶等玻璃器皿,如不能立即洗,也应立即放入洗涤液中浸泡,然后用瓶刷(试管刷)内外刷洗,最后用清水或蒸馏水冲洗2~3次,晾干备用。如有油污时可用热碱水(或热肥皂水等)洗涤,再用清水冲洗干净,当倒置仪器,器壁形成一层均匀的水膜,无成滴水珠,也不成股向下流时,即已洗净。然后倒置控水自然干燥,急用时可放干燥箱烘干。若需要更洁净的器皿,可用铬酸洗涤液浸泡(试管、烧杯、培养皿等浸泡10min,吸管、滴定管则要1~2h),然后用自来水冲洗干净,最后用蒸馏水清洗,器皿洁净、光亮。

装固体培养基的玻璃器皿应先将其基质刮去,然后洗涤。接触过菌液或微生物培养物的玻璃器皿,使用后应立即投入2%的来苏儿或0.25%的新洁尔灭或5%的石炭酸消毒24h,然后高压蒸汽灭菌,然后用瓶刷内外刷洗,自来水冲洗干净后再用蒸馏水冲洗。

吸过血液、血清、菌液或含糖溶液的玻璃吸管,使用后应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内,免得干燥后难以冲洗干净。量筒或标本瓶底应垫以脱脂棉花,否则吸管投入时容易破损。待实验完毕再集中清洗。若吸管顶部塞有棉花,则冲洗前先将吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接,用水将棉花冲出来。

洗涤载玻片、盖玻片时,先看是否使用了香柏油,载玻片上如滴有香柏油,要先用吸水纸擦拭去油,再用吸水纸沾少许二甲苯擦拭,然后放入肥皂水中煮沸5~10min,用自来水冲洗干净,干燥后可保存在95%的酒精中备用。用时可在火焰上烧去酒精。此方法洗涤和保存的载玻片清洁透亮,没有水珠。检查过致病菌的载玻片及盖玻片,应先用2%的来苏儿或0.25%的新洁尔灭浸泡消毒,高压蒸汽灭菌后按上述方法洗涤保存。

② 新购置的玻璃器皿的清洗 新购置的玻璃器皿常含有较多的游离碱,最好用1%~2%的盐酸溶液浸泡2~6h,再用清水洗涤,也可浸在肥皂水中12h,再用自来水冲洗。

③ 橡胶类物品的清洗 未接触有害微生物的,可用自来水洗干净,用蒸馏水浸泡并煮沸、晾干、包装。

接触了有害微生物的,应先用自来水煮15~20min或高压蒸汽灭菌后,再按上述方法处理。

④ 金属器械的清洗 未接触有害微生物的,可直接清洗,擦干。接触了有害微生物的,应用高压蒸汽灭菌器121℃灭菌20min,急用时可灼烧灭菌。

几种常用的洗涤液见表1-5。洗涤砂芯玻璃滤器的常用洗涤液见表1-6。

表1-5 几种常用的洗涤液

表1-6 洗涤砂芯玻璃滤器的常用洗涤液

(2)玻璃器皿的干燥 洗净的玻璃器皿,一般是在室温下自然干燥,若需要高温干燥或急需,可使用电热干燥箱干燥,温度一般在80~120℃为宜,使用干燥箱时应注意,要在温度下降到60℃以下再打开箱门,取出器材使用。

(3)玻璃器皿的包扎 包扎是灭菌前的一项重要工作,其目的是使灭菌后的器材在一定时间内保持无菌状态。

微生物实验玻璃器皿包扎法

① 培养皿的包扎 将洗净干燥的培养皿,每5~10套叠在一起,用牛皮纸或报纸边滚动边压住报纸卷起培养皿,将其包扎成圆筒状,两个端头随着滚动要让两边的纸进行折叠(图1-24),折叠的大小尽量一致,使其两端的纸折叠成底与盖,再用棉纱线捆扎好,以免散开。然后进行干热灭菌。使用时在无菌室中打开取出培养皿。

图1-24 培养皿的包扎

② 试管、锥形瓶的包扎 试管和锥形瓶灭菌,都需要做合适的棉塞,棉塞可起过滤作用,避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时,一般用纤维长的棉花,不用脱脂棉,因为脱脂棉易吸水变湿,造成污染。要求棉塞紧贴玻璃管壁,没有缝隙,松紧适宜。过紧容易挤破管口且不易塞入;过松易掉落和污染。制作棉塞时,应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块,铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上,用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞,然后直接压入试管或锥形瓶口,也可借用玻璃棒塞入。通常会选用折叠卷塞法制作棉塞(图1-25)。棉塞的长度不小于管口直径的2倍,约2/3塞进管口(图1-26)。若干支试管用绳扎在一起,在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸,再用绳打一个活结。锥形瓶加棉塞后单个用报纸或牛皮纸包扎,进行干热或湿热灭菌。若试管和锥形瓶中装有培养基,包扎后应用笔标记培养基的名称、制备时间等。为了节省棉花或节省时间,在配制实验临时所用的无菌水和培养基时,也可以用硅胶试管塞代替棉塞。装液体培养基的锥形瓶口,可包扎6~8层纱布以代替棉花。其他如无菌抽滤瓶和细菌滤器等的灭菌可采用同样的方法进行包扎。

图1-25 折叠卷塞法制作棉塞的过程

图1-26 试管棉塞

1—正确;2—管内太短,外部太大;3—棉塞太松;

4—管内太大,外部太小

③ 吸管的包扎(图1-27) 洗涤干净且烘干后的吸管,在口吸的一端用尖头镊子或针塞入少许脱脂棉花(距管口0.5~1cm处),以防止使用时将外界的杂菌吹入管中或将管内的菌液吸出管外,塞入棉花的量要适宜(1~2cm长),松紧要合适,既可使吹吸气体流畅且棉花不易滑落。管口有棉絮纤维外露时可用火焰烤去。每支吸管用一条宽4~5cm的纸条(旧报纸或牛皮纸),吸管的尖端在头部,将纸条一端折叠成3~4cm的双层区,以30°~40°的夹角折叠纸条包住尖端(夹角太小则纸条易松开,夹角太大则纸条长度要求长),然后用手压紧吸管在桌面上向前搓转,吸管以螺旋形包扎起来,吸管的尾部用剩余纸条打结,防止纸卷松开,并在结上标注吸管的规格。常常是若干支吸管扎成一束放入移液管筒中,进行干热或湿热灭菌,或将多支包扎好的吸管用报纸或牛皮纸总包裹后再扎好,进行干热灭菌或湿热灭菌,备用。要在使用时才从吸管中间拧断纸条抽去吸管,切忌从头部打开,禁止手指接触吸管尖部至吸管的1/3处。

图1-27 吸管的包扎方法

三、任务评价

对照标准(表1-7)自我评价,小组评价,检查任务完成情况。

表1-7 实训操作评价标准

四、注意事项

(1)接触过微生物的器皿洗涤前一定要先进行灭菌处理。

(2)玻璃器皿使用后应及时进行清洗,一方面有利于选择合适的洗涤剂,因为在当时容易判断残留物的性质;另一方面,仪器内壁不留有难去除的附着物,但搁置一段时间后,就有残留物附着到仪器内壁,使洗涤变得困难。

(3)切不可任意使用各种试剂来洗涤玻璃仪器,根据实验目的选择适宜的试剂及方法,以达到洗涤标准。

使用铬酸洗涤液的注意事项

    

重铬酸钾是强酸氧化剂洗涤液,有很强的氧化能力,对玻璃仪器又极少有侵蚀作用,所以这种洗涤液在实验室内的使用最广泛。新配制的洗涤液为红褐色,氧化能力很强。当洗涤液用久后变为黑绿色,即说明洗涤液无氧化洗涤作用。使用铬酸洗涤液进行洗涤时,应尽量避免稀释。若想加快作用速度,可将洗涤液加热至40~50℃进行洗涤。当器皿上带有大量有机质时(如沾有油渍、凡士林和石蜡等),不可直接用洗涤液来洗涤,应尽量先行清除污物,否则洗涤液很快会失效。金属器皿不能用此洗涤液洗涤。洗涤液有强腐蚀性,如溅到桌椅上,应立即用水冲洗或用湿布擦拭。皮肤或衣服上粘有洗涤液,应立即用水冲洗,然后再用碳酸钠溶液或氨水洗。