大黄

RHEIRADIX ET RHIZOMA

本品为蓼科植物掌叶大黄Rheum 　palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Max-im.ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎[1]。掌叶大黄主产于甘肃、青海、西藏、四川等地。唐古特大黄主产于青海、甘肃、西藏等地。药用大黄主产于四川、贵州、云南、湖北等省。前两种习称“北大黄”，后一种习称“南大黄”。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖，除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。其味苦、性寒。具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经的功效[1]。

【主要成分】　主要含结合蒽醌及游离蒽醌衍生物；结合蒽醌主要有番泻苷A、番泻苷B、番泻苷C、番泻苷D、番泻苷E，大黄酚-1-葡萄糖苷，大黄素甲醚-8-葡萄糖苷，大黄素-1-葡萄糖苷，大黄素-8-葡萄糖苷，芦荟大黄素-8-葡萄糖苷，大黄酸-8-葡萄糖苷等。尚含苯丁酮苷类、二苯乙烯苷类等多种苷类[2]。亦含鞣质、有机酸、糖类、挥发油等。

【定性分析】　取本品粉末0.1g，加甲醇20mL，浸泡1h，滤过，取滤液5mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，加热回流30min，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。

【含量测定】　总蒽醌、游离蒽醌[1]（高效液相色谱法）

1.总蒽醌

（1）色谱条件与系统适用性试验　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。

（2）对照品溶液的制备　精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1mL含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2mL，混匀，即得（每1mL中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg，含大黄素甲醚8μg）。

（3）供试品溶液的制备　取本品粉末（过四号筛）约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加8％盐酸溶液10mL，超声处理2min，再加三氯甲烷10mL，加热回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（4）测定法　分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含芦荟大黄素（C15H10O5）、大黄酸（C15H8O6）、大黄素（C15H10O5）、大黄酚（C15H10O4）和大黄素甲醚（C16H12O5）的总量不得少于1.5％。

2.游离蒽醌

（1）色谱条件与系统适用性试验　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为254nm。理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000。

（2）对照品溶液的制备　精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1mL含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2mL，混匀，即得（每1mL中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16μg，含大黄素甲醚8μg）。

（3）供试品溶液的制备　取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（4）测定法　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含游离蒽醌以芦荟大黄素（C15H10O5）、大黄酸（C15H8O6）、大黄素（C15H10O5）、大黄酚（C15H10O4）和大黄素甲醚（C16H12O5）的总量计，不得少于0.20％。

【现代研究】

韩媛媛等采用HPLC-荧光检测法测定东乐膏中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量。方法是采用Phenomenex Luna C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液（85：15），流速1.0mL/min，荧光检测器检测，激发波长为442nm，发射波长为514nm。

高晓燕等采用HPLC-DAD法同时测定大黄中大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素、番泻苷A和番泻苷B，7个蒽醌类化合物的含量。方法：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18（150mm× 4.6mm，5μm），流动相为0.05％磷酸水溶液-乙腈，梯度洗脱，流速为1mL/min，检测波长254nm。

袁晓等以大黄酚为参照物，采用高效液相色谱梯度洗脱，测定了10批大黄样品，建立了以大黄药材蒽醌成分为特征的指纹图谱，色谱柱为YMC-ODS-AQC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-0.2％磷酸水（B），检测波长270nm，柱温25℃，流速1.0mL/min。通过高压液相指纹色谱分析，鉴定了13个色谱峰的化成分，找出24个共有峰，相似度均大于0.92。

程小丽等采用RP-HPLC-DAD同时测定大黄中5种游离蒽醌类成分（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚），2种双蒽酮类成分（番泻苷A、番泻苷B），以及没食子酸、儿茶素，合计9种成分含量。方法是流动相0.05％磷酸水溶液-乙腈，梯度洗脱，流速1mL/min，检测波长280nm，柱温40℃。

毛春芳等采用HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、没食子酸、儿茶素共计11种成分的含量。方法是采用Symmetry C18色谱柱，流动相为甲醇-0.1％磷酸水梯度洗脱，体积流量1.0mL/min，柱温30℃，检测波长254nm。

陈岑等采用毛细管电泳法同时测定清肺抑火丸中大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚等5种蒽醌类成分的含量。方法：采用毛细管电泳法，以对乙酰氨基酚为内标。毛细管柱为未涂层弹性融硅石英毛细管柱，运行缓冲液为25mmol/L硼砂溶液+20mmol/L十二烷基磺酸钠+4mmol/L磺丁基醚-β-环糊精+2％甲醇（pH10.01），分离电压为18kV，进样方式为重力进样10s（高度15cm），检测波长为254nm，温度为25℃，湿度<70％。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：23.

［2］任伟光，王琦，黄林芳.大黄类药材的质量评价进展［J］.中南药学，2014（4）：354-359.

［3］魏玉辉，武新安，陈岚等.大黄蒽醌类成分含量测定方法实验研究［J］.兰州大学学报，2005，31（1）：13-14.

（秦梅颂）