第三节　质量标准及稳定性研究

依照《中国药典》2005年版一部的有关规定，参考《中药新药研究指南》，研究制定了血栓心脉宁片的质量标准。

按照《药品注册管理办法》及有关规定，对血栓心脉宁片进行了24个月的连续稳定性考查。结果表明，在贮存期内，血栓心脉宁片外观及内在质量稳定。

一、原料（药材）的质量标准草案

1.丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。主要产地：陕西、河南、山东、山西、河北、四川、江苏。

本品应符合《中国药典》2005年版一部52页丹参项下有关规定。

2.川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根及根茎。主要产地：四川、贵州、云南。

本品应符合《中国药典》2005年版一部28页川芎项下有关规定。

3.毛冬青为冬青科植物毛冬青Ilex pubescens Hook. Et Arn.的干燥根。主要产地：广东、广西。

标准参见《中国药典》2005年版一部附录22页。

4.水蛭为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirude mipponica Whitman或柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥体。主要产地：全国大部分地区均产。

本品应符合《中国药典》2005年版一部57页水蛭项下有关规定。

5.槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾。

本品应符合《中国药典》2005年版一部第246页槐花项下有关规定。

6.麝香为鹿科动物林麝Moschus berezovskii Flerov、马麝Moschus sifanicus Przewalski或原麝Moschus moschiferus Linnaeus成熟雄体香囊中的干燥分泌物或人工麝香。天然麝香主要产地：四川、西藏等。

天然麝香应符合《中国药典》2005年版一部266页麝香项下有关规定。

人工麝香应符合卫生部标准（试行）WS-210（Z-32）-93项下有关规定。

7.冰片为无色透明或白色半透明的片状松脆结晶；有清香气，具挥发性，点燃浓烟，并有带光的火焰。

本品应符合《中国药典》2005年版一部98页冰片项下有关规定。

8.牛黄为牛科动物牛Bos taurus domesticus Gmelin干燥的胆结石或体外培育牛黄。

本品应符合《中国药典》2005年版一部47页牛黄项下有关规定。

体外培育牛黄应符合《中国药典》2005年版一部120页体外培育牛黄项下有关规定。

9.人参茎叶总皂苷为五加科植物人参Panax ginseng C. A Mey.的干燥茎叶经提取精制而成。主要产地：东北三省。

本品应符合《吉林省药品标准》1986年版人参茎叶皂苷项下有关规定。

10.蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。主要产地：山东、河北等地。

本品应符合《中国药典》2005年版一部265页蟾酥项下有关规定。

二、药品中主要辅料的质量标准

滑石粉：为白色或类白色、微细、无砂性的粉末，手摸有滑腻感。无臭、无味。本品应符合《中国药典》2005年版一部243页滑石粉项下有关规定。

硬脂酸镁、羧甲淀粉钠等辅料均应符合《中国药典》2005年版一部相应项下有关规定。

三、药品成品的质量标准草案

【处方】

川芎　丹参　槐花　毛冬青　水蛭

麝香　冰片　牛黄　人参茎叶总皂苷　蟾酥

【制法】

以上十味。麝香、冰片、牛黄、人参茎叶总皂苷、蟾酥粉碎成细粉；丹参、毛冬青用80%乙醇回流提取二次，每次2h，加醇量为生药量的7倍，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.20~1.30（60℃测）的稠膏，药渣备用；川芎加6倍量水提取挥发油，收集挥发油，蒸馏后水溶液另器收集，药渣备用；水蛭与醇提药渣合并加8倍量水，煎煮2h，滤过，滤液放置，药渣与上述川芎药渣混合，加8倍量水，煎煮2h，滤过，滤液与上述各煎液合并，浓缩至相对密度1.20~1.30（60℃测）稠膏时，与醇提取膏混合，减压干燥，粉碎成细粉；槐花加6倍量水，用饱和碳酸钙水溶液调pH值8~9，加热至微沸，保温40min，趁热滤过，药渣如上法再提取二次，合并滤液，在60~70℃，搅拌加入浓盐酸，调pH值4~5，静置1~2h，抽滤上清液，沉淀用适量水洗3~4次，减压干燥，粉碎成细粉，与上述各细粉混匀，制成颗粒，干燥，加入适量滑石粉、硬脂酸镁、羧甲淀粉钠，并喷加川芎挥发油，混匀，压制成1 000片，包薄膜衣，即得。

【性状】

本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显棕色。气清香，味微苦。

【鉴别】

（1）取本品5片，研细，称量1.5g置磨口锥形瓶中，加乙醚30ml回流提取1h，滤过，滤液挥散溶剂至近干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮ⅡA对照品加三氯甲烷制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2µl点于同一硅胶G板上（青岛产预制板），以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（11∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。

（2）取川芎对照药材0.5g，加入乙醚10ml冷浸1h，滤过，滤液自然挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取鉴别（1）项下供试品溶液、对照药材溶液各1µl点于同一硅胶G薄层板上（青岛产预制板），以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外线灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（3）取本品3片，研细，称量1g加甲醇10ml冷浸过夜，滤过，滤液作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述二种溶液各1µl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（7∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110℃烘箱中加热2~3min后，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点。

（4）取冰片对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取鉴别（1）项下供试品溶液，对照品溶液各1µl，分别点于同一硅胶G薄层板上（青岛产预制板），以石油醚（60~90℃）-乙醚（7∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，于110℃加热至斑点显色清晰后，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点。

（5）取胆酸对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取鉴别（3）项下供试品溶液、对照品溶液各1µl，点于同一硅胶G薄层板上（青岛产预制板），以三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（2∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，置110℃烘箱中加热5min后，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点。

（6）取本品5片，研细，称量2g，加甲醇30ml回流提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，加入1.5ml硫酸，置沸水浴中，水解2h后，立即冷却，用三氯甲烷萃取两次（乳化后，以4 000r/min离心5min），每次20ml，合并三氯甲烷萃取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参二醇、人参三醇，各制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各1µl，分别点于同一硅胶G薄层板上（青岛产预制板），以三氯甲烷-乙醚（7∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110℃烘箱中加热5~7min后，供试品色谱中，在与对照品色谱中相应位置显相同颜色的斑点。

【检查】

本品应符合片剂项下有关的各项规定（《中国药典》2005年版一部附录ⅠD）。

【含量测定】

丹参酮ⅡA

照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）测定。

对照品溶液的制备：

精密称取丹参酮ⅡA对照品2.5mg，置于5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液（每1ml含丹参酮ⅡA 0.25mg）。

供试品溶液的制备：

取本品20片，研细，取约8g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚60ml，回流提取至无色，提取液挥散乙醚至干，残渣加三氯甲烷溶解，定量转移至5ml量瓶中，并加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

测定法：

精密吸取供试品溶液2µl，对照品溶液1µl、4µl，照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，分别点于同一硅胶G（青岛产预制板）薄层板上，以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（11∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB薄层扫描法）进行扫描，波长λs=480nm，λR=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。

本品每片含丹参酮ⅡA不得少于60µg。

丹酚酸B

照高效液相色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅤD）测定。

色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-乙腈-0.5%甲酸溶液（30∶9∶61）为流动相；检测波长286nm。理论板数按峰计算，丹酚酸B应不低于3 000。

对照品溶液的制备：

精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇溶解，制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品。

供试品溶液的制备：

取本品10片，除去包衣，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率25kHz）30min，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含有效成分以丹酚酸B（C36H30O16）计不应低于12mg。

【功能与主治】

活血散瘀、通络止痛、芳香开窍，用于脑血栓、冠心病、心绞痛属气滞血瘀证者。

【用法与用量】

口服，一次2片，一日3次。

【规格】

基片重0.40g。

【贮藏】

密闭，放阴凉干燥处。

四、血栓心脉宁片质量标准草案起草说明

血栓心脉宁片为片剂剂型，现将质量标准起草的有关问题说明如下：

【品名】

本品是在血栓心脉宁胶囊的基础上通过改变剂型而研制的一个四类新药。依据卫生部《药品注册管理办法》中复方制剂的命名原则，采用功效结合剂型，命名为血栓心脉宁片（Xueshuan Xinmaining Pian）。

【处方】

处方来源于《中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂》第十八册，无修改。

【制法】

详见第四章制备工艺及其研究资料。

【性状】

如成品标准草案，三批中试样品均与正文描述一致。

【鉴别】

1.方中丹参的特征鉴别。阴性试验未见干扰，列入正文（图3-2）。

2.方中川芎的特征鉴别。阴性试验未见干扰，列入正文（图3-3）。

3.方中槐花的特征鉴别。阴性试验未见干扰，列入正文（图3-4）。

4.方中冰片的特征鉴别。阴性试验未见干扰，列入正文（图3-5）。

5.方中人参茎叶总皂苷的特征鉴别。阴性试验未见干扰，列入正文（图3-6）。

6.在试验中曾对方中贵重药材麝香进行了薄层鉴别，虽经多次试验，均未检出具有专属性特征的斑点，故未列入正文。

7.在试验中曾对方中蟾酥进行了薄层鉴别，虽经多次试验，均未检出具有专属特征的斑点，故未列入正文。

【检查】

1.重量差异检查

本品每片标示重量为0.40g，按《中国药典》2005年版一部附录ⅠD片剂项下要求，对本品片剂重量进行检查（表3-13），表明本品符合规定。

2.崩解时限检查

按《中国药典》2005年版一部附录ⅠD片剂项下要求，采用LB-881型六管崩解仪（上海分析仪器厂无锡分厂），对本品进行崩解时限测定（表3-14）。

上述测定结果均符合规定。

3.卫生学检查

本品经卫生学检查，细菌总数、真菌总数、大肠埃希菌、活螨、沙门菌等均符合卫生学标准。

【含量测定】

丹参为方中君药，其化学成分丹参酮ⅡA和丹酚酸B是丹参的有效成分。因此，将丹参酮ⅡA和丹酚酸B作为本制剂的含量测定指标，丹参酮ⅡA采用薄层扫描法测定，丹酚酸B采用高效液相色谱法测定。

1.丹参酮ⅡA含量测定

薄层色谱条件：青岛海洋化工厂分厂产硅胶G薄层板，以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（11∶2）为展开剂，双波长扫描条件：反射锯齿扫描λS=480nm，λR=700nm，狭缝1.25mm×1.25mm，扫描速度2mm/min，照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）测量供试品吸收度积分值，计算丹参酮ⅡA的含量，测定5批样品（表3-15）。

测定结果表明，血栓心脉宁片中丹参酮ⅡA的含量基本稳定，由于本处方药味较多，制法复杂，因此暂限定血栓心脉宁片中丹参酮ⅡA含量不得少于60µg。

通过方法学考察表明，成品中丹参酮ⅡA含量测定方法简单，灵敏度高，重现性好，结果准确。

2.丹酚酸B含量测定

色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5µm），流动相：甲醇-乙腈-0.5%甲酸溶液（30∶9∶61），流速1.0ml/min，检测波长286nm，柱温30℃，进样量5µl。测定5批样品丹酚酸B含量（表3-16）。

测定结果表明，血栓心脉宁片中丹酚酸B的含量基本稳定，由于本处方药味较多，制法复杂，因此暂限定血栓心脉宁片丹酚酸B含量不得少于12mg。

通过方法学考察表明，成品中丹酚酸B含量测定方法简单，灵敏度高，重现性好，结果准确。

五、稳定性研究

血栓心脉宁片是由川芎、丹参等10味中药经合理工艺研制而成的四类新药。根据《药品注册管理办法》的规定，在初步稳定性试验基础上，考察了该制剂的稳定性，并将考察方法及结果报告如下：

（一）考察项目及方法

1.项目

包括性状、鉴别、硬度、崩解时限、含量测定及微生物限度检查。

2.方法

将3批样品在室温防潮处放置24个月，分别于0个月，3个月，6个月，12个月，18个月，24个月进行各项指标考察。

（1）性状：

采用肉眼观察法。本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后，显棕色，气清香，味微苦。

（2）鉴别：

采用薄层色谱法鉴别，方法见本品质量标准。

（3）硬度：

采用四用测定仪测定。

（4）崩解时限：

按《中国药典》2005年版一部片剂项下要求测定。

（5）含量测定：

按本品质量标准方法测定样品中丹参酮ⅡA的含量。

（6）微生物限度检查：

依据卫生学标准进行检查。

（二）结果

本品3批样品不同贮藏期各项指标考核及测定结果均符合所拟质量标准的要求。

（三）结论

血栓心脉宁片在室温防潮处放置24个月，经以上6项指标的考核和测定，均无明显变化，表明本品在贮存期内稳定，稳定性良好。