任务三　悬滴法观察细菌的运动

一、任务分析

细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。若需了解某菌是否具有鞭毛可采用悬滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力。另外，此法还可以检查微生物对化学物质的趋化性。

悬滴法就是将细菌液滴加在洁净盖玻片中央，在其四周涂上凡士林，覆盖上凹载玻片，菌液正处于凹槽中央，然后翻转玻璃片，由于细菌不受盖玻片的压力影响，所以此法常用于观察并区别细菌运动的方式，也可观察细菌的繁殖方式及孢子萌发等。细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。有鞭毛的细菌运动活泼，细菌的运动有一定的前进方向，并可转弯，极生单鞭毛菌类多为直线运动，周生鞭毛菌类多做波浪式运动。无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。悬滴法是不染色的显微检查法。

二、任务实施

1．明确目标

（1）学会用悬滴法观察细菌的运动性。

（2）培养学生规范操作和无菌意识。

2．任务准备

（1）器材　显微镜、凹载玻片、盖玻片、镊子、接种环、滴管、擦镜纸、记号笔。

（2）试剂　香柏油、二甲苯、凡士林。

（3）材料　枯草芽孢杆菌的斜面菌种（15～18h），金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（14～18h）。

3．实施方案

（1）制备菌液　在幼龄菌斜面上，挑取数环菌于盛有1～2mL无菌水的试管中，制成轻度混浊的菌悬液。

（2）涂凡士林　取一块洁净无油腻的盖玻片1片，用牙签取少量凡士林，在其四周涂上少量的凡士林。

（3）滴加菌液（图2-22）　在盖玻片中央滴一小滴菌液，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微观察时，易于寻找菌液的位置。

（4）盖凹载玻片　将凹载玻片翻转向下，使凹窝中心对准盖玻片中央的菌液滴，并轻轻地盖在盖玻片上，使盖玻片与凹载玻片粘在一起。然后迅速翻转，使菌液滴正好悬浮在盖玻片下和凹窝中心。然后用牙签轻压盖玻片，使其四周边缘与凹孔边缘的凡士林粘紧封闭，液滴处于封闭的小室中，防止液滴干燥和气流的影响（图2-23）。

（5）镜检　先用低倍镜找到标记，即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察（2-24）。由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。

镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动）。可观察到有鞭毛的枯草芽孢杆菌和假单胞菌活跃运动，从一处移到另一处；而不具有鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动，无位置的改变，仅在原处左右摆动。

4．结果分析

将观察到的细菌运动结果记录于表2-15中。

三、任务评价

对照标准（表2-16）自我评价，小组评价，检查任务完成情况。

四、注意事项

（1）观察细菌运动的载玻片和盖玻片都要洁净无油腻，否则会影响细菌的运动。有些细菌温度太低时不能运动。

（2）若使用油镜观察，应在盖玻片上加一滴香柏油。