实训14 甘草的鉴定

【实训目标】熟练掌握甘草的性状、显微与理化鉴别方法；学会依据国家药品标准，综合鉴定甘草的真伪优劣；学会书写检验报告书。

【实训准备】

1．实训材料 甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch. 、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat．或光果甘草Glycyrrhiza glabra L．的干燥根及根茎。甘草药材、甘草粉末、甘草永久制片、甘草对照药材、甘草酸单铵盐对照品、甘草苷对照品、甘草酸铵对照品。

2．实训器具 显微镜、回流提取装置、紫外分析仪、点样器、硅胶G薄层板、展开缸、电吹风、紫外光灯、高效液相色谱仪、分析天平、标准药筛筛、具塞锥形瓶、超声处理器等。

3．实训试剂 稀甘油、水合氯醛试液、乙醚、甲醇、正丁醇、1%氢氧化钠溶液、乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸、蒸馏水、10%硫酸乙醇溶液、十八烷基硅烷键合硅胶、乙腈、0.05%磷酸溶液、70%乙醇等。

【实训内容及步骤】

1．性状鉴别

（1）甘草：呈圆柱形，长25～100cm，直径0.6～3.5cm。外皮松紧不一，红棕色或灰棕色，有明显的纵皱纹、沟纹及稀疏的细根痕，皮孔横长，两端切面中央稍下陷；根茎表面有芽痕。质坚实，断面略显纤维性，黄白色，粉性，具明显的形成层环纹及放射状纹理，有裂隙；根茎断面中央有髓。气微，味甜而特殊。

（2）胀果甘草：根及根茎木质粗壮，有的分枝，表面灰棕色或灰褐色，外皮粗糙。质坚硬，木纤维多，粉性小。根茎不定芽多而粗大。

（3）光果甘草：根及根茎质地较坚实，有的分枝，表面灰棕色，外皮不粗糙。皮孔细小而不明显。

2．显微鉴别

（1）甘草横切面：木栓层为数列棕色细胞。栓内层较窄。韧皮部射线宽广，多弯曲，常现裂隙；纤维多成束，非木化或微木化，周围薄壁细胞常含草酸钙方晶；筛管群常因压缩而变形。束内形成层明显。木质部射线宽3～5列细胞；导管较多，直径约至160μm；木纤维成束，周围薄壁细胞亦含草酸钙方晶。根中心无髓；根茎中心有髓。

（2）甘草粉末：淡棕黄色。①纤维及晶纤维：纤维成束，直径8～14μm，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；草酸钙方晶多见。②导管：具缘纹孔导管较大，直径至160μm，稀有网纹导管。③木栓细胞：多角形或长方形，红棕色，微木化。④淀粉粒：多为单粒，卵圆形或椭圆形，脐点点状。⑤棕色块状物：形状不一。

3．理化鉴别

（1）薄层色谱：①供试品溶液的制备：取本品粉末1g，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，即得。②对照药材溶液的制备：取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。③对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，即得。④薄层色谱试验：吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。⑤结果判断：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，应显相同的橙黄色荧光斑点。

（2）检查：①水分（以烘干法测定）不得过12.0%。②总灰分不得过7.0%。③酸不溶性灰分不得过2.0%。④有机氯农药残留量：六六六（总BHC）不得过千万分之二，滴滴涕（总DDT）不得过千万分之二，五氯硝基苯（PCNB）不得过千万分之一。⑤重金属及有害元素：按铅、镉、砷、汞、铜测定法测定，铅不得过百万分之五，镉不得过千万分之三，砷不得过百万分之二，汞不得过千万分之二，铜不得过百万分之二十。

（3）含量测定：按高效液相色谱法测定。①色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按表2-2中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm。理论板数按甘草苷峰计算应均不低于5000。②对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含甘草苷20μg、甘草酸铵0.2mg的溶液，即得。③供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。④测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。⑤结果判断：本品按干燥品计算，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50%，甘草酸（C42H62O16）不得少于2.0%。

【实训提示】甘草含有甘草甜素，为甘草酸的钾、钙盐，甘草酸水解得二分子葡萄糖醛酸和一分子甘草次酸。另含黄酮类化合物、生物碱类、无机元素等。

【实训报告与考核】

1．绘甘草根横切面简图及粉末特征图；记录理化鉴定结果。

2．将综合鉴定结果与药品标准相比较，判断供试品是否符合规定。

3．书写药品检验报告书。